中醫(yī)古籍

  • 西安交大用胎兒軟骨細胞培養(yǎng)成功軟骨組織工程種子細胞

    西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境與疾病相關(guān)基因教育部重點實驗室和人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)系聯(lián)合攻關(guān)，采用體外培養(yǎng)的方法，從人胎兒第1~5代傳代軟骨細胞中，成功地培養(yǎng)篩選出可作為軟骨組織工程的種子細胞，為軟骨組織工程種子細胞的選擇開拓了新思路。

    據(jù)介紹，人胎兒軟骨細胞是軟骨組織工程種子細胞的來源之一，但多年來對其體外培養(yǎng)生長、代謝變化進行的系統(tǒng)研究較少，特別是對人胎兒軟骨細胞在體外擴增中隨傳代次數(shù)增加，逐漸向纖維樣細胞轉(zhuǎn)化，軟骨的標志性蛋白Ⅱ型膠原及聚集蛋白聚糖減少等“去分化”現(xiàn)象的研究更顯滯后。

    為探討人胎兒軟骨細胞體外培養(yǎng)過程中生長及代謝的變化，為軟骨組織工程的應(yīng)用精確地篩選出種子細胞，研究人員從體外培養(yǎng)實驗入手，將4~6月流產(chǎn)胎兒的關(guān)節(jié)透明軟骨，通過切片、消化、染色、接種及5代傳代等系列技術(shù)處理后，采用愛茜藍法檢測軟骨細胞聚集蛋白聚糖中糖胺聚糖（GAG）的含量；用免疫細胞化學(xué)和RT-PCR檢測Ⅰ、Ⅱ型膠原及聚集蛋白聚糖在蛋白和mRNA水平的表達，成功地從傳代5代的胎兒軟骨細胞中，篩選出第2代胎兒軟骨細胞作為最合適于“回植時機”的軟骨組織工程的種子細胞。

    結(jié)果顯示：其原代細胞24小時后開始伸展集落生長，8~10天形成單細胞，細胞排列緊密，折光性強，生長旺盛，增殖率高，第2代優(yōu)于第1代，而第3~5代增殖率則逐漸下降。同時還發(fā)現(xiàn)，第2代軟骨細胞GAG含量、Ⅱ型膠原mRNA水平和聚集蛋白聚糖核心蛋白mRNA水平明顯較高，與第3、4、5代之間有顯著性差異（P<0.05），提示人胎兒第2代軟骨細胞優(yōu)于其他幾代軟骨細胞。

    研究人員認為，在體外培養(yǎng)軟骨組織工程種子細胞中，最關(guān)鍵的是要解決軟骨細胞合適的“回植時機”問題和“去分化”現(xiàn)象，因此要求在一定時限內(nèi)快速而高效地獲取數(shù)量多、功能好的軟骨細胞。同時，軟骨中的Ⅱ型膠原含量，被視為軟骨細胞的特征性標志。本研究結(jié)果表明，體外培養(yǎng)的第2代軟骨細胞Ⅱ型膠原蛋白表達顯著，當軟骨細胞平均擴增17.4倍時，其形態(tài)特征、代謝功能均能維持較佳水平，最接近體內(nèi)狀態(tài)，因此可作為組織工程化軟骨構(gòu)件理想的種子細胞。

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