山海棠總生物堿可誘導(dǎo)肺腺癌A549細(xì)胞凋亡

第三軍醫(yī)大學(xué)軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室科研人員完成的一項國家自然科學(xué)基金課題中發(fā)現(xiàn)，昆明山海棠總生物堿（THHa）可明顯抑制人肺腺癌A549細(xì)胞增殖，并可誘導(dǎo)其凋亡。這一研究結(jié)果，為THHa開發(fā)應(yīng)用于臨床肺癌的綜合治療提供了新思路。

THHa是從衛(wèi)茅科雷公藤屬植物昆明山海棠根莖和根皮中提取的主要成分。有研究表明，THHa臨床治療自身免疫性疾病療效較好，對血液系統(tǒng)腫瘤有抑制作用，但對實體瘤特別是肺癌的抑制作用，目前國內(nèi)外鮮有報道。

為探討THHa對肺癌的治療作用及其機理，科研人員采用體外實驗研究方法，將人肺腺癌A549細(xì)胞株稀釋成單細(xì)胞懸液后，加入THHa溶液放于培養(yǎng)板中進行培養(yǎng)，并設(shè)對照組（只加入等體積的細(xì)胞，不加藥液）與實驗組作比較。經(jīng)培養(yǎng)、染色、熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀檢測等方法，觀察A549細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及凋亡情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：實驗組經(jīng)THHa作用后，A549細(xì)胞形態(tài)變圓，體積縮小，核顏色加深，折光性加強，A549細(xì)胞明顯受到生長抑制，其抑制作用呈藥物濃度和時間依賴性；而對照組細(xì)胞則出現(xiàn)貼壁生長，胞漿飽滿，融合成片，無核固縮現(xiàn)象。兩組A549細(xì)胞生長抑制率相比，有顯著性差異（P<0.05）。此外，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測還發(fā)現(xiàn)，實驗組在濃度為12.5微克/毫升 THHa作用下，A549細(xì)胞24小時的凋亡率為3.37%，48小時為8.90%；濃度增大為200微克/毫升時，24小時和48小時A549細(xì)胞的凋亡率分別為20.16%和28.34%，兩種濃度細(xì)胞凋亡率相比，有顯著性差異（P<0.01）。提示THHa誘導(dǎo)A549細(xì)胞在一定范圍內(nèi)有時間和劑量依賴性，濃度和作用時間增加，細(xì)胞的凋亡率也逐漸升高，同時其抑制率（濃度和時間正相關(guān)性）與凋亡率（濃度與時間正相關(guān)性）之間呈正直線相關(guān)關(guān)系（P<0.01）。

據(jù)指導(dǎo)此項研究的曹佳教授介紹，細(xì)胞凋亡是一個主動的多基因參與調(diào)節(jié)的細(xì)胞自殺過程，在控制腫瘤細(xì)胞的增殖和死亡過程中起重要作用。細(xì)胞增殖需要通過凋亡來維持細(xì)胞數(shù)目的恒定，滯后的細(xì)胞死亡往往導(dǎo)致人多種癌癥的發(fā)生。許多抗癌制劑都是通過凋亡途徑激發(fā)細(xì)胞毒性來達到抗腫瘤的目的，因而能否引起腫瘤細(xì)胞凋亡和誘導(dǎo)凋亡能力的高低，是評價化療藥物優(yōu)劣的重要指標(biāo)之一。本研究結(jié)果表明，THHa在體外能誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，具有抗肺癌的生物活性，這為THHa用于肺癌的治療提供了實驗依據(jù)。