分子印跡技術(shù)用于中藥分離有據(jù)可依

中藥活性成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜、類型多樣、含量低、不穩(wěn)定，因此分離純化較為困難，目前主要依賴于硅膠柱色譜、大孔吸附樹脂柱色譜、聚酞胺柱色譜、凝膠柱色譜、高效逆流色譜、制備型高效液相色譜等色譜技術(shù)。為了得到純度高的活性成分，需經(jīng)多種溶劑萃取和反復(fù)柱色譜，不僅溶劑消耗量大、環(huán)境污染嚴(yán)重，而且效率和收率也較低。

近年來(lái)，一種以與目標(biāo)分子具有高度識(shí)別的分子印跡聚合物(MIPs)為固定相進(jìn)行的色譜分離技術(shù)——分子印跡技術(shù)(MIT)在中藥活性成分分離純化中的應(yīng)用研究廣泛展開，涉及黃酮、多元酚、生物堿、甾體、香豆素等多種結(jié)構(gòu)類型的化合物。這些研究均取得了較好的效果，為在生產(chǎn)實(shí)踐中推廣該技術(shù)提供了依據(jù)。

現(xiàn)狀：MIT分離中藥研究逐步展開

目前，有關(guān)MIT在藥學(xué)領(lǐng)域的文獻(xiàn)半數(shù)以上涉及手性物的分離和分析，而其在中藥活性成分的分離純化中的應(yīng)用雖然還不是很多，但都收到了較好的效果。

黃酮：目前所報(bào)道的利用MIT分離純化的黃酮類化合物多以槲皮素為模板、丙烯酞胺為功能單體。例如，北京大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院的謝建春等首先將槲皮素MIPs直接用于銀杏葉提取物水解液的分離，得到了槲皮素和與其結(jié)構(gòu)相似的山柰酚，其中槲皮素的回收率為89%，從而證明了利用MIPs直接從中藥中獲得具有相同藥效的化合物的可能性。Zhu等則以槲皮素為模板制備的MIPs作為固相萃取材料，篩選到了藏藥緣毛錦雞兒中兩個(gè)活性比槲皮素強(qiáng)的表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑：(E)-piceatannol和butein，兩者回收率分別為80%和76%。

此外，謝建春等還以2，2-羥甲基丁醇三甲基丙烯酯(TRIM)為交聯(lián)劑制備了槲皮素MIPs，將其用于分子印跡固相萃取(MIP-SPE)，從服用了銀杏葉提取物水解液的大鼠血漿中分離并測(cè)定出槲皮素和異鼠李素，表明該MIP-SPE能有效潔凈水溶性生物樣品，并直接進(jìn)行定量測(cè)定。

多元酚：茶多酚中的兒茶素類成分結(jié)構(gòu)相似，尤其是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和其對(duì)映體沒食子兒茶素沒食子酸酯(GCG)，常規(guī)方法難以分離。中南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院的雷啟福等嘗試以EGCG為模板，以α-甲基丙烯酸為功能單體，以乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑制備了MIPs，從茶多酚中分離富集EGCG獲得了滿意效果。該院的向海艷等以白藜蘆醇為模板，以丙烯酞胺為功能單體，以偶氮二異丁腈為引發(fā)劑制備了MIPs，并對(duì)虎杖提取液進(jìn)行了分離，僅經(jīng)過兩步洗脫(甲醇淋洗后，5%醋酸甲醇溶液洗脫)，就得到了白藜蘆醇及少量白藜蘆醇苷，且兩者達(dá)到了良好的分離效果。

生物堿：MIT在生物堿中的應(yīng)用較多，特別是手性異構(gòu)體的分離與測(cè)定。例如，Dong等以中藥麻黃中的成分(－)-ehedrine為模板，以甲基丙烯酸為功能單體，合成了(－)-ehedrine分子印跡聚合物，該聚合物對(duì)(－)-ehedrine有良好的選擇性和親和力。將其用于分子印跡固相萃取(MIP-SPE)，直接從麻黃中提取出了(－)-ehedrine，經(jīng)高效液相分析，純度較高，回收率和精密度良好，表明MIP-SPE能直接用于麻黃中(－)-ehedrine的定量測(cè)定。

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院的陳移嬌等以咖啡因?yàn)槟０?，采用水溶液懸浮聚合法制備了微米?jí)分子印跡聚合物微球(MIPMs)，當(dāng)以茶葉堿為競(jìng)爭(zhēng)分子時(shí)，該MIPMs對(duì)咖啡因有很強(qiáng)的吸附和特異性選擇識(shí)別能力，能對(duì)茶葉中的咖啡因進(jìn)行分離富集。Xie等用哈爾滿(harman)為模板制備了MIPs，并作為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的固定相，分離和在線鑒別了駱駝蓬種籽甲醇提取物中兩個(gè)和哈爾滿結(jié)構(gòu)類似的抗癌組分：哈爾明堿(harmine)和哈馬林(harmaline)。

甾體：甾體類化合物結(jié)構(gòu)相似，采用常規(guī)方法很難對(duì)某一組分進(jìn)行分離純化和定量測(cè)定。而甾體分子大多含有羥基取代基，可以利用其和功能單體形成氫鍵或酯鍵，制備出相應(yīng)的MIPs，使之得到高效分離。目前，應(yīng)用MIT選擇性分離、分析甾體分子已成為關(guān)注的熱點(diǎn)，但多數(shù)涉及人體內(nèi)的一些活性物質(zhì)，如膽固醇、皮質(zhì)醇等，用于植物中甾體成分的分離純化較少。

油菜素甾酮被認(rèn)為是一種可以刺激植物生長(zhǎng)的活性物質(zhì)，但常規(guī)提取過程非常繁瑣。Kuglmiya等利用p-乙烯基苯硼酸和油菜素甾酮中的兩組順式羥基發(fā)生酯化作用，制備了共價(jià)MIPs。由于該法所得的MIPs對(duì)模板具有嚴(yán)謹(jǐn)、精確的吸附，能夠防止同樣具有順式羥基的雌激素三醇等成分的干擾。：Hu等用MIP-SPE從秦皮中提取得到了秦皮乙素，并通過選擇洗滌和洗脫溶劑，設(shè)計(jì)了一個(gè)分離秦皮乙素和其結(jié)構(gòu)類似物秦皮甲素、香豆素、7-氧基香豆素及瑞香素的方案。

挑戰(zhàn)：技術(shù)難題仍需攻克

雖然MIT在中藥分離中的應(yīng)用研究已日益廣泛，而且與其他色譜分離技術(shù)相比，它具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，包括分子識(shí)別性強(qiáng)、固定相制備簡(jiǎn)便快速、操作簡(jiǎn)單且溶劑消耗量小、模板和MIPs都可以回收再利用等。但是，作為一種新型的分離手段，MIT本身還存在許多有待解決的問題，如分子印跡和識(shí)別過程的機(jī)制和定量描述、功能單體和交聯(lián)劑的選擇局限性等。

首先，MIT應(yīng)用的有些模板往往十分昂貴或難于得到，且通常每合成1克干聚合物就需要50～100微摩爾/升的模板，模板需要量較大，回收率也有待進(jìn)一步提高。

其次，MIT在特殊的分離領(lǐng)域的應(yīng)用還需大力研究，由于結(jié)合位點(diǎn)的非均勻性和實(shí)際可利用官能團(tuán)的數(shù)量有限，MIPs作為高效液相色譜（HPLC）固定相時(shí)常常出現(xiàn)色譜峰過寬和拖尾的情況，從而使柱效降低，影響了分離效果。因此，為獲得較大批量的產(chǎn)物，達(dá)到較大規(guī)模的制備水平，需要進(jìn)一步增加聚合物中的實(shí)際有效結(jié)合位點(diǎn)以增加分離柱容量。

三是目前制備相對(duì)分子質(zhì)量較高的成分的MIPs有一定困難，所以現(xiàn)在使用的模板均為小分子的苷元，需要進(jìn)一步開發(fā)中藥活性成分的模板。MIPs的聚合方法多樣，包括溶液聚合(本體聚合)法、懸浮聚合法、原位聚合法、種子聚合法、表面印跡法等，而在上述文獻(xiàn)中，多用溶液聚合法。這種方法需研磨過篩，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，材料損失也較多。

盡管MIT具有上述種種局限性，還有待進(jìn)一步深入研究，但由于其具備很高的選擇性以及優(yōu)良的理化特性，必然會(huì)隨著技術(shù)本身的不斷發(fā)展和應(yīng)用的逐漸增多，而在中藥活性成分分離純化領(lǐng)域發(fā)揮越來(lái)越大的作用。