酸奶飲料中低聚木糖的測定

原理：酸奶飲料中蔗糖、乳糖及添加劑干擾低聚木糖組分的分離，為了更準(zhǔn)確地測定酸奶中低聚木糖的含量，將酸奶飲料用氫氧化銅沉降蛋白、脂肪，再用60％乙醇水溶液沉降去除大分子多糖及高聚合度低聚糖，而后進(jìn)行硫酸水解，低聚木糖組分水解變?yōu)槟咎恰Ｋ崮田嬃现械途勰咎呛浚ǎ?，以木糖?jì)）即為酸奶飲料中水解前后木糖含量的差值。

步驟：1．試劑：

4mol／L硫酸：98％硫酸用水稀釋而成，需標(biāo)定較準(zhǔn)確濃度；

45％氫氧化鈉：取22．5g氫氧化鈉，加入50ml水溶解即可；

4％氫氧化鈉：取8．0g氫氧化鈉，加入200ml水溶解即可；

7％硫酸銅：取35．0g硫酸銅結(jié)晶，加入500ml水溶解即可。無水乙醇（AR）、乙腈（色譜級(jí)）。

2．儀器及色譜條件：

儀器：高壓液相系統(tǒng)：515高壓泵、U6K進(jìn)樣閥、柱溫箱、2414示差折光檢測器、色譜工作站，真空泵或電吹風(fēng)。

色譜條件：色譜柱：鍵合氨基柱（nova－pak250×3．9mmidsteel，4μm）；

流動(dòng)相：乙腈∶水（75∶25v／v）；流速：1．0ml／min；柱溫：35℃；示差檢測器溫度：35℃。3．樣品預(yù)處理：

取10．0ml酸奶飲料，加入水20ml，搖勻，加入7％硫酸銅，4％氫氧化鈉4．0ml，加水定容100ml，搖勻；

濾紙過濾，取濾液50．0ml，濃縮至10．0ml，加入無水乙醇12．0ml，沉降聚合度高的低聚糖；

用0．45μm膜過濾，用電吹風(fēng)（大于50℃）吹趕盡乙醇，用水溶解定容至10．0ml（該溶液為樣品水解前上機(jī)測定溶液M1）；

取9．0ml于水解管中，加入4mol／mlH2SO41．62ml，搖勻，于100℃水解1小時(shí)，冷卻；

用45％NaOH中和（pH值5～6），加入少量活性炭粉脫色，冷卻；

濾紙過濾，取清液3．0ml，加入12．0ml無水乙醇，搖勻；

當(dāng)有Na2SO4析出時(shí)，用0．45μm水相膜過濾，取濾液10．0ml，電吹風(fēng)吹干；

加水溶解，定容1．0ml，用0．45μm水相膜過濾（該溶液為樣品水解后上機(jī)測定溶液M2），上機(jī)測定。4．總稀釋體積：V（ml）＝100×10／50×（9．0＋1．62＋1．44）／9．0×（3．0＋12．0）／3．0／10．0×1．00＝13．4ml。

5．計(jì)算：以木糖為標(biāo)樣，外標(biāo)單點(diǎn)校正。

Mi（g／100ml，以木糖計(jì)）＝Aspl／Astd×Cstd×V×10－3／W×100低聚木糖含量X（％，以木糖計(jì)）＝M2－M1M2：酸奶飲料水解后低聚木糖含量（％）；M1：酸奶飲料水解前低聚木糖含量（％）；

Aspl：樣品中木糖組分峰面積；

Astd：標(biāo)樣木糖組分峰面積；

Cstd：標(biāo)樣木糖組分濃度（mg／ml）；V：總稀釋體積（ml）；W：樣品重量（ml）。