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右旋紫草素和紫草素促進大鼠肉芽組織增生的組織學(xué)研究
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曾報道，紫草的醚提物能加速棉球誘導(dǎo)的肉芽組織增生。本次對右旋紫草素和紫草素促進大鼠肉芽組織增生的作用進行了組織學(xué)研究。
材料和方法：
①棉球誘導(dǎo)肉芽組織增生實驗：右旋紫草素和紫草素分別溶于1%吐溫80。雄性Wistar大鼠體重約為250g，隨機分組。在乙醚麻醉下，背部皮膚消毒后做一切口，皮下植入一重約20.0±1.0mg的消毒棉球（其中右旋紫草素組及紫草素組棉球內(nèi)分別含0.1ml及0.3ml不同藥液，對照組僅植入一個內(nèi)含0.1ml吐溫的棉球）。分別于術(shù)后5d及10d取出棉球及肉芽組織，在60℃培養(yǎng)箱干燥24h，棉球重量比植入前增加的部分即肉芽組織干重。
②流式細胞儀分析淋巴細胞抗原表達：帶肉芽組織的棉球，在PBS中剪碎并通過300目篩去棉球碎片，離心并用氯化銨溶血，沖洗后與不同的熒光標(biāo)記抗體（結(jié)合R－PE的抗CD3抗體及結(jié)合FITC的抗CD11b抗體）室溫孵育30min。在流式細胞計數(shù)儀上分析CD3+和CD11b+細胞占白細胞總數(shù)的百分比。
③組織學(xué)觀察：分別于術(shù)后5d及10d取出長有肉芽組織的棉球及其覆蓋的皮膚，固定，脫水，石蠟包埋，做到4μm厚的病理切片，再經(jīng)脫臘，0.3%過氧化氫甲醇封閉，分別與抗TGF-β抗體及抗α－平滑肌肌動蛋白抗體孵育，用SABC法進行免疫組化染色。
結(jié)果和討論：
①右旋紫草素和紫草素有促進大鼠肉芽組織增生的作用。術(shù)后10d右旋紫草素和紫草素組的肉芽組織干重較對照組顯著增加，但兩種藥物之間無顯著性差異，術(shù)后5d各組肉芽組織干重?zé)o差異。
②兩種藥物都沒有增加肉芽組織中CD3+細胞數(shù)量，但術(shù)后10d兩個藥物組肉芽組織中CD11b+細胞數(shù)量較對照組明顯增加。
③右旋紫草素組和紫草素組術(shù)后5d皮下組織厚度都有增加，其中表達TGF－β的巨噬細胞和浸潤細胞增加，10d后浸潤細胞減少，成纖維細胞增加，可觀察到棉球周圍肉芽組織有膠原合成及再上皮化。另外術(shù)后5d細胞外α－平滑肌肌動蛋白增加，肉芽組織周圍可見新生血管。研究表明，右旋紫草素和紫草素可促進炎性細胞浸潤，新生毛細血管增加，成纖維細胞及膠原含量增加，從而促進大鼠肉芽組織增生。