葛根及其制劑中異黃酮類(lèi)成分測(cè)定方法的研究進(jìn)展

葛根為豆科植物野葛(pueraria、Lobatawilldohwi)或甘葛藤(puerariathomsoniiBenth)的干燥根。近年來(lái)，經(jīng)過(guò)葛根化學(xué)成分、臨床藥理的科學(xué)研究表明：葛根的主要有效成分為異黃酮化合物［1，2］，其中葛根素的含量最高，因此測(cè)定葛根中異黃酮類(lèi)成分(主要是葛根素)的含量，成為評(píng)價(jià)葛根藥材及其制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，本文概述了近10年來(lái)的研究進(jìn)展。

1　分光亮度法

1.1　紫外分光亮度法

主要利用葛根素分子結(jié)構(gòu)中羥基和芳環(huán)形成較強(qiáng)的共軛體系，對(duì)紫外光(250±1nm)有較強(qiáng)的特征吸收，且性質(zhì)穩(wěn)定。

劉直［3］采用大豆素代替葛根素作為對(duì)照品，在250nm波長(zhǎng)處測(cè)定愈風(fēng)寧心片中總異黃酮的含量，并與以葛根素為對(duì)照品的測(cè)定方法作了比較，結(jié)果表明：大豆素標(biāo)準(zhǔn)品可以代替葛根素標(biāo)準(zhǔn)品用于總異黃酮的測(cè)定。

梁文法等［4，5］以氯仿-無(wú)水乙醇(7∶3)為展開(kāi)劑，在硅膠G-CMC-Na薄層板上分離葛根素，以乙醇洗脫，在251nm波長(zhǎng)處測(cè)定葛根及愈風(fēng)寧心片中葛根素的含量。

周小初等［6］以氯仿-甲醇-水(7∶2.5：0.25)為展開(kāi)劑，測(cè)定了冠心靈片中葛根素的含量，并對(duì)葛根藥材中葛根素含量進(jìn)行比較，結(jié)果表明野葛根與粉葛根中葛根素含量相差10～67倍。

王名洲等［7］選用正丁醇處理樣品，采用薄層-紫外法對(duì)心通口服液中葛根素的含量進(jìn)行測(cè)定，該方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、結(jié)果準(zhǔn)確。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)r=0.9996，平均回收率為99.57%，RSD為0.60%。

葛新等［8］采用薄層層析一階導(dǎo)數(shù)光譜法對(duì)益心腦膠囊中葛根素含量進(jìn)行測(cè)定，加樣回收率為96.43%，RSD為1.25%。1.2　薄層層析-比色法　用薄層層析分離葛根素，利用葛根素分子結(jié)構(gòu)中的酚羥基，能與磷鎢酸-磷鉬酸試劑產(chǎn)生顏色反應(yīng)，在700nm波長(zhǎng)處有最大吸收的特性進(jìn)行比色測(cè)定。

詹貴成等［9］利用硅膠G薄層板，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(27∶28∶40∶10)展開(kāi)，葛根素為對(duì)照品，在700nm波長(zhǎng)處測(cè)定了葛根芩連湯中葛根素的含量。

徐禮等［10］以氯仿-甲醇(8∶2)為展開(kāi)劑，測(cè)定了葛根藥材中葛根素的含量。

2　色譜法

2.1　薄層掃描法(TLCS)

多用于測(cè)定葛根及其制劑中葛根素的含量。具有取樣量少，操作簡(jiǎn)便，分離效果好，結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)。

趙勝利等［11］以展開(kāi)劑Ⅰ：氯仿-甲醇-水(60∶40∶9)分離葛根素，以展開(kāi)劑Ⅱ：氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(2∶2∶4∶1)分離黃豆甙元，用鹽酸羥銨-硝酸鈰銨為顯色劑，選用440nm濾光片，掃描測(cè)定了愈風(fēng)寧心片中兩種成分的含量。

趙世萍等［12］以甲苯-甲醇-10%甲酸(7∶3∶0.2)和醋酸乙酯-甲醇-50%甲酸(8∶2∶0.2)為展開(kāi)劑，在硅膠G薄層板上分離了大豆甙元、大豆甙、葛根素和大豆甙元-4’，7-二葡萄糖，采用雙波長(zhǎng)反射鋸齒掃描法，在λs=250nm，λR=360nm，測(cè)定了葛根及愈風(fēng)寧心片中四種成分含量。

閔慶旺等［13］，選用硅膠GF254預(yù)制薄層板，醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)為展開(kāi)劑，蘆丁為內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行單波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描λs=275nm，測(cè)定愈風(fēng)寧心片中葛根素的含量，線(xiàn)性范圍為0.38～3.8μg。

傅先玨等［14］采用中性氧化鋁柱處理樣品以硅膠GF254薄層板為固定相，氯仿-甲醇-水(60∶40∶9)為展開(kāi)劑，在飽和氨蒸氣下展開(kāi)，進(jìn)行雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描λs=260nm、λR=360nm測(cè)定復(fù)方傷風(fēng)膠囊中葛根素的含量。

李守拙等［15］選用硅膠GF254薄層板，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-冰醋酸(8∶4∶1∶0.5)及氯仿-甲醇(5∶1)兩次展開(kāi)，進(jìn)行雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描λs=254nm、λR=333nm，測(cè)定了20批頸復(fù)康沖劑中葛根素的含量。

秦青［16］以95%乙醇處理樣品，氯仿-甲醇-水(25∶16∶3)為展開(kāi)劑，進(jìn)行掃描測(cè)定λs=258nm，λR=360nm，測(cè)定玉泉沖劑中葛根素的含量，線(xiàn)性范圍0.24～0.60μg。

郭建平等［17］采用高效硅膠板GF254，氯仿-甲醇-水(7∶2.5∶0.5)為展開(kāi)劑，在255nm處紫外掃描測(cè)定葛根提取物及其制劑中葛根素的含量。

李正國(guó)等［18］采用超聲振蕩處理樣品，氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(8.1∶9.4∶26∶4)為展開(kāi)劑，進(jìn)行雙波長(zhǎng)反射法線(xiàn)性?huà)呙瑕藄=305nm，λR=369nm。測(cè)定了止痢沖劑中葛根素的含量。

張蕾等［19］采用硅膠G薄層板，氯仿-甲醇-水(60∶40∶6.5)為展開(kāi)劑，進(jìn)行雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描λs=270nm、λR=370nm，對(duì)不同品種和產(chǎn)地的葛根中所含葛根素進(jìn)行測(cè)定比較，結(jié)果野葛根中所含葛根素較粉葛根高約8～10倍。

蘇健等［20］采用硅膠G0.3%CMC-Na薄層板，氯仿-甲醇-水(78∶35∶10)下層液為展開(kāi)劑，進(jìn)行單波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描λs=265nm，測(cè)定鎮(zhèn)腦寧膠囊中葛根素的含量。葛根素濃度在1.054～5.27μg范圍內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系。2.2　高效液相色譜法(HPLC)　多用于葛根及其制劑中葛根素的測(cè)定。具有分析精度高，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)，樣品多采用不同濃度的甲醇、乙醇直接提取，也有經(jīng)柱層析分離等方法。

張偉等［21］采用SpherisorbC18(5.0×200mm)色譜柱，甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相，柱溫40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，以聚酰胺粉凈化處理樣品，測(cè)定鼻炎膠囊中葛根素含量，空白無(wú)干擾。

李汶等［22］采用ODS柱(250×4.6mm，5μm)，甲醇-50%醋酸液為流動(dòng)相，采用梯度淋洗方式于UV280nm波長(zhǎng)處測(cè)定腦脈康膠囊中葛根素的含量，線(xiàn)性范圍為0.156～2.94μg，平均加樣回收率99.89%，RSD為0.55%。

張世勤等［23］選用ODSC18(4.6×250mm)色譜柱，流動(dòng)相甲醇-水(25∶75)，水為50mgEDTA與15.6gNaH2PO3溶至1000mL雙蒸餾水的混合液。檢測(cè)波長(zhǎng)305nm，測(cè)定根痛平中葛根素的含量。

譚生健等［24］采用ShimpackCLC_ODS(150×6mm)分析柱，ODS保護(hù)柱，流動(dòng)相甲醇-水(23∶77)，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，外標(biāo)法計(jì)算含量，測(cè)定葛根芩連片中葛根素的含量。李光慧等［25］采用KYWG-C18為固定相，水-甲醇-N，N-二甲基甲酰胺(40∶10∶3)為流動(dòng)相，UV檢測(cè)波長(zhǎng)250nm,對(duì)御感袋泡茶中葛根素進(jìn)行含量測(cè)定。

李冠忠等［26］采用YWG10μm,C18(250×4.6mm)色譜柱，甲醇-水(25∶75)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，外標(biāo)法，測(cè)定心通口服液中葛根素含量，平均回收率為98.67%，RSD為1.23%。

仲英等［27］選用ResolveC18(8×100mm)徑向加壓色譜柱，以甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，外標(biāo)法，分別測(cè)定了2～12月份采集的葛根中葛根素的含量與其質(zhì)量變化。結(jié)果葛根在不同季節(jié)葛根素的含量差異較大，6月份含量最高，約為3.5%，質(zhì)量變化不大。

張小茜等［28，29］采用C18(4.6×250mm)色譜柱，甲醇-水(25∶75)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，以30%乙醇為溶劑超聲振蕩處理樣品，分別測(cè)定葛根及愈風(fēng)寧心片中葛根素的含量。

章育中等［30］選用ZorbaxODS(4.0×250mm)層析柱，甲醇-水(32∶68)為流動(dòng)相，流速0.4～1.4mL/min，橙皮甙為內(nèi)標(biāo)物，測(cè)定不同產(chǎn)地葛根及愈風(fēng)寧心片中大豆甙元-4’，7-二葡萄糖甙、葛根素、4’-甲氧基葛根素、大豆甙、大豆甙元五種異黃酮的含量。

馮瑞芝等［31］采用ZY110　YWQ-C18(10μm，4.0×250mm)色譜柱，流動(dòng)相(1)MeOH-H2O-CH2Cl2-1.7×10-3mol/L　NH4Ac(100∶275∶2∶50)；(2)MeOH-H2O-1.7×10-3mol/LNH4Ac(175：175∶50)用于分離黃豆甙元，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm對(duì)6種葛屬植物根中五種異黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果野葛質(zhì)量最佳，其次是粉葛。