水飛薊素藥理研究進展

在眾多的抗自由基天然產(chǎn)物中，水飛薊素（silymarin）為少數(shù)幾個在臨床上廣泛使用的藥物之一，而且經(jīng)過近30年的臨床檢驗，證明該藥的確切療效和極低的毒性。近年來對該藥的研究較為活躍，歸納該藥的主要作用特點有以下幾點：

1抗自由基活性

水飛薊素對于由CCl4、半乳糖胺、醇類和其它肝毒素（如Amanitaphalleodes）造成肝損害有保護作用。1990年Lotteron等人報道了在小鼠肝微粒體內(nèi)，水飛薊素能減少由CCl4

代謝物引起的體外脂質(zhì)過氧化及由還原型輔酶Ⅱ（NADPH）單獨引起的過氧化作用，這些都表明水飛薊素為鏈中斷抗氧化劑或為自由基清除劑。Carlos等人用化學(xué)發(fā)光法測定水飛薊賓（silybin）和水飛薊素體外抗超氧陰離子O2-、羥基自由基、烷氧基自由基的作用。水飛薊素和水飛薊賓能抑制H2-O2-luminol產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光。采用此種方法可以判斷物質(zhì)的抗氧化能力。與（＋）兒茶素（carechin）和VitE相比，抑制此體系化學(xué)發(fā)生50％時，水飛薊素的濃度為0.30μg／mL，水飛薊賓為0.75μg／mL，兒茶素為25ng／mL，VitE為30μg／mL。水飛薊素和水飛薊賓抑制luminol-過氧化酶產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光，則表示其抗超氧陰離子的作用。與SOD比較，抑制化學(xué)發(fā)光50％時，SOD的濃度為3.2ng/mL、水飛薊素為0.8μg/mL、水飛薊賓為5.5μg／mL，說明水飛薊素和水飛薊賓抗超氧陰離子作用較弱。采用特丁基氫過氧化物與亞鐵離子的化學(xué)發(fā)光法，來判定水飛薊賓和水飛薊素對烷氧基自由基的作用。抑制化學(xué)發(fā)光50％時，水飛薊素濃度為1.6μg／mL、水飛薊賓為2.8μg／mL、VitE為2.5μg/mL。這個結(jié)果表明水飛薊素和水飛薊賓對烷氧基自由基有非常強的清除作用。H2O2被催化能生成氧氣（O2），通過測定生成O2的量，可以間接判定H2O2對物質(zhì)的氧化作用，但無論是SOD還是水飛薊賓二琥珀酸酯二鈉鹽（SDH）都不能改變O2的生成速度，表明他們兩者都無清除H2O2的作用。采用脫氧核糖法測定SDH對羥基自由基的清除作用，其結(jié)果表明SDH不象其它黃酮類抗氧劑，如槲皮素和myricetin，SDH在含有Fe3+-EDTA和H2O2的體系中不刺激·OH的生成，而且無論是否存在EDTA，均能抑制脫氧核糖的降解。SDH在無EDTA存在時也能抑制脫氧核糖降解，說明它具有一定金屬離子絡(luò)合能力，但這種作用并不與其濃度成正比，只能說明絡(luò)合能力較弱。而且實驗表明SDH能與·OH迅速結(jié)合，其反應(yīng)速度常數(shù)為K=（1.0～1.2）×1010／ms。

2抗脂質(zhì)過氧化作用

水飛薊素和水飛薊賓為抗氧自由基活性物質(zhì)。其抗脂質(zhì)過氧化的作用已經(jīng)被實驗證實。Philippe等人報道水飛薊素對由CCl4誘導(dǎo)所致脂質(zhì)過氧化的保護作用，并討論了作用機制，指出水飛薊素具有防止CCl4誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化作用，即水飛薊素減少CCl4的代謝激活生成的自由基和對這些自由基有清除作用。

水飛薊賓或水飛薊素能使CCl4對脂質(zhì)的共價結(jié)合明顯減少。CCl4所致的脂質(zhì)過氧化被水飛薊素和水飛薊賓分別減少72％和32％。Valenguela等人報道SDH對由NADPH-Fe2+-ADP和特丁基氫過氧化物誘發(fā)微粒體脂過氧化抑制作用。評價脂質(zhì)過氧化的方法為測定生成的丙二醛和化學(xué)發(fā)光。結(jié)果表明水飛薊素對·OH的清除作用強于對丁氧基自由基的清除作用?！H自由基可攻擊脂肪酸、蛋白質(zhì)核酸，導(dǎo)致組織損傷。在所有活性氧自由基中，·OH引起的損害最大。Bindoli等人研究了水飛薊素在線粒體和微粒體中抗Fe2+-抗壞血酸或NADPH-Fe2+-ADA誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化作用。通過O2攝入量、丙二醛生成和線粒體膨脹來確定水飛薊素的抗脂質(zhì)過氧化作用。在其實驗中，當(dāng)水飛薊素先于Fe2+-抗壞血酸加入線粒體時，其濃度為3μmol/L即可產(chǎn)生抗脂質(zhì)過氧化作用，而在20μmol／L時則完全抑制由Fe2+-抗壞血酸引發(fā)的脂質(zhì)過氧化作用。反之將Fe2+-抗壞血酸先于水飛薊素加入線粒體中時，水飛薊素在80μmol／L時，完全抑制Fe2+-抗壞血酸誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化。水飛薊素抗由Fe2+-抗壞血酸誘發(fā)脂質(zhì)過氧化作用。可以從O2攝入量和丙二醛的生成量中觀察到，水飛薊素在25μmol／L時，可完全抑制脂質(zhì)過氧化發(fā)生，并且在等摩爾濃度時，水飛薊素在線粒體中抗脂質(zhì)過氧化作用為α-生育酚的10倍。在肝微粒體內(nèi)，水飛薊素能抑制由NADPH-Fe2+-ADP誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化。其濃度與在線粒體內(nèi)抑制脂質(zhì)過氧化的濃度大致相同。Valenguela等人研究了水飛薊素對由乙醇誘導(dǎo)的肝脂質(zhì)過氧化的抑制作用，當(dāng)口服乙醇時，由于乙醇被細胞色素P45201E1氧化代謝，生成烷氧基自由基，它使肝脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生丙二醛和促使化學(xué)發(fā)光加強。同時，也使肝中的谷胱甘肽（GSH）減少了36％，氧化型谷胱甘肽（GSSG）增加128％，GSH／GSSG比值減少。然而預(yù)先給予水飛薊素時，當(dāng)單獨給乙醇時，丙二醛的生成和化學(xué)發(fā)光加強受到完全抑制。這表示由乙醇引起的肝脂質(zhì)過氧化受到抑制。水飛薊自己本身能作為自由基清除劑，特別是對由細胞色素P45201E1代謝激活所生成的乙氧基自由基有較強的清除作用。通過滅活這些自由基，水飛薊素阻礙這些自由基與不飽和脂肪酸的作用。水飛薊素能使肝中總GSH增加32％。我國學(xué)者芮耀誠等人研究了水飛薊賓對缺血-再灌注腦產(chǎn)生氧自由基、脂質(zhì)過氧化物及白三烯（LT）的影響。以腦缺血沙土鼠為模型，將SOD和丙二醛作為指標(biāo)，觀察藥物對氧自由基、LT及脂質(zhì)過氧化的作用。腦缺血-再灌注損傷引起腦組織中SOD和MDA含量的顯著變化，SOD值降低、MDA升高，ip水飛薊賓100，200，400mg／kg，使沙土鼠腦缺血損傷后的SOD含量顯著升高，MDA顯著降低。腦缺血30min，再灌注30min后，LT含量顯著升高，水飛薊賓（200mg／kg）能顯著降低缺血-再灌注引起的LT升高。Antonello等人給小鼠服高鐵飲食并服用水飛薊賓100mg（kg·d），4個月后測定其脂質(zhì)過氧化，其結(jié)果表明肝的GSH水平增高，特別是GSSG水平也增高，這雖然與常規(guī)細胞氧化應(yīng)激時，GSH減少相矛盾，但是高水平的GSSG反映了由GSH過氧酶代謝脂質(zhì)氫過氧化，而使GSH氧化加劇。實驗結(jié)果還表明，使用水飛薊賓能防止脂質(zhì)過氧化和肝GSH增加。而且還說明水飛薊素也為鐵離子絡(luò)合劑，即水飛薊賓通過雙重作用減少鐵離子超載所致的毒性。

3抗脂氧酶作用

Dgle等人發(fā)現(xiàn)脂氧酶抑制劑對冷束縛應(yīng)激所成的胃潰瘍有較強的抑制作用。并指出其潰瘍生成涉及LT。而水飛薊素在其實驗?zāi)Ｐ椭?，顯示具有較好脂氧酶抑制作用。其抗?jié)冏饔脙?yōu)于雷尼替丁，潰瘍指數(shù)（ulcerindex）為（0.58士0.34）％。Fiebrich等在體外實驗也證明水飛薊素為脂氧酶抑制劑和前列腺素合成酶抑制劑。Pueria等人研究水飛薊素在各種炎癥模型上和白細胞遷移的藥理作用，表明水飛薊素對由角叉菜膠引起急性炎癥的抑制作用，其ED50為62.42mg／kg。水飛薊素對由甲苯引起的小鼠耳水腫型作用，依據(jù)臨床給藥不同而產(chǎn)生不同藥效。局部給藥時的抑制率為44.52％，而吲哚美辛為35.96％，而經(jīng)腹腔內(nèi)給藥作用較低，說明其生物利用度較低。水飛薊素在高劑量時能抑制由角叉菜膠所致的白細胞浸潤，ED50為73.34mg／kg，而且中性白細胞遷移也明顯減少。這表明水飛薊素在體內(nèi)有較強的抗炎作用，正是由于水飛薊素的抗自由基作用，使其能抑制環(huán)氧酶和脂氧酶，并預(yù)示水飛薊素除保肝作用外，還可作為抗炎藥物使用。我國學(xué)者林愛友等人認為腦組織和腦血管含有豐富的脂氧酶，具有合成LT的能力，腦缺血時LT釋放增加。以槲皮素為對照，研究了水飛薊賓對培養(yǎng)豬腦基底動脈合成及釋放LT的影響。其研究結(jié)果表明水飛薊賓同槲皮素一樣，具有抑制腦血管內(nèi)5-脂氧酶合成和釋放LT的作用，這揭示水飛薊賓對腦缺血具有保護作用。

4抗GSH徘空作用

GSH被認為是對抗化學(xué)誘導(dǎo)細胞毒最重要的生物分子。GSH能參與活性異生物質(zhì)的清除、氫過氧化物的還原或直接清除自由基。GSH在異生物質(zhì)誘導(dǎo)肝損傷中的保護作用已經(jīng)為實驗所證實。水飛薊素和SDH具有對異生物質(zhì)，包括毒傘素（phalloidin）、鵝膏蕈堿（α-amanitin）、鐠（praseodymium）、CCl4、乙硫酰胺（ethione）引起肝毒性具有保護作用。水飛薊素不同于其它抗氧化的黃酮類似物，它可以增加肝和其它組織中GSH水平。已發(fā)現(xiàn)服用水飛薊素后，在肝、腸、胃等消化器官中，GSH增加，說明水飛薊素能增加氨基酸的內(nèi)臟通透性，這使GSH合成增加，并且抑制由膽汁釋放GSH。在非消化器如肺、脾、腎等器官，水飛薊素不能影響其水平變化，在腎中其GSH水平稍有降低，這說明腎在體內(nèi)是一個血漿GSH降解的主要部位。水飛薊素使GSH在消化器官內(nèi)增加，可以保護上述組織免受異生物質(zhì)的損害，起到解毒作用。有報道使用SDH可以使服用過量乙酰胺苯酚小鼠肝中GSH增加，并且消除其藥害作用。

5抗腫瘤作用

各種活性氧能氧化鳥嘌呤形成8-羥基鳥嘌呤，造成DNA損傷，進而引起腫瘤，應(yīng)用抗氧化劑，特別是自由基清除劑可以防止這一過程的發(fā)生。水飛薊素作為一個有效的抗自由基物質(zhì)也顯示了預(yù)防和治療惡性腫瘤的作用。近兩年來對水飛薊素的抗腫瘤作用研究得特別活躍。Ahmad等人研究了水飛薊素對引起小鼠皮膚腫瘤增長的若干個皮膚腫瘤起動因子（EGFR）的防護作用，實驗證明這些皮膚腫瘤增長因子的作用完全可以被水飛薊素抑制。在其研究中，使用含有EGFR表達的表皮腫瘤細胞A431，評價水飛薊素抗皮膚腫瘤的增長作用和由于激活EGFR導(dǎo)致細胞循環(huán)過程紊亂。用水飛薊素處理過的細胞，完全抑制了配基誘導(dǎo)EGFR激活，并且不影響蛋白質(zhì)水平。使用水飛薊素也可導(dǎo)致酪氨酸磷酸化，在水飛薊素抑制EGFR激活過伴有EGFR內(nèi)激酶活性受到抑制，用水飛薊素處理細胞顯示了對DNA合成及細胞增長的抑制。上述結(jié)果表示水飛薊素對皮膚病的化學(xué)防護作用是由EGFR信息修補體系調(diào)節(jié)所致。由于表皮生長因子受體和其家族的表皮生長因子在前列腺癌中起重要作用，因此，抑制表皮生長因子就成為一種防治前列腺癌的研究方向。Zi等人證明水飛薊素能抑制人前列腺癌Dul45細胞的增長。用人乳腺腫瘤細胞MDA-MB468測定了水飛薊素的活性，結(jié)果顯示出極大的抑制作用。Zi等人還報道了水飛薊素對12-O-四癸?；鸩ù?13-酸酯（TDA）和oradaicacid（OA）引起小鼠皮膚腫瘤有抑制作用，預(yù)先以水飛薊素處理小鼠皮膚然后加入TPA或OA，則其誘發(fā)腫瘤作用被抑制，同時由TPA和OA引起的腫瘤壞死因子（TNFα）的RNA在小鼠皮膚上表達也被完全抑制。巨噬細胞產(chǎn)生的TNFα在肝臟類癥損傷中起非重要的作用，如重癥肝炎和慢性肝炎等病人體內(nèi)產(chǎn)生TNFα的能力均高于正常人，肝臟表面存在大量的TNFα受體，在脂多糖（LPS）所致的肝損傷中，TNFα是一個關(guān)鍵性介質(zhì)。我國學(xué)者張俊年等人也研究了水飛薊賓對肝臟類癥損傷、TNF產(chǎn)生及其生物活性的影響。結(jié)果表明：水飛薊賓在體內(nèi)外均可顯著抑制LPS誘導(dǎo)TNF產(chǎn)生，在體外能抑制TNF對肝細胞因子GSG-7701和成纖維細胞系L929的細胞毒作用：在體內(nèi)對LPS誘導(dǎo)的痤瘡丙酸桿菌致敏的小鼠肝臟類癥損傷有保護作用。這表明水飛薊素的保肝作用機制可能與其抑制TNF的產(chǎn)生和活性有關(guān)。

6降血脂作用

動脈粥樣硬化（atherosclerosis）是心、腦血管病的重要病理基礎(chǔ)，血漿脂質(zhì)代謝紊亂是動脈粥樣硬化形成的重要危險因素。大量臨床試驗證明，血漿甘油三酯（TC）和低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）水平升高或高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）水平下降，都會使冠心病的危險性增加，與此相反，降低血漿TC和LDL-C水平或升高HDL-C水平，可延緩動脈粥樣硬化病變的進展，減少冠心病的危險性。極低密度脂蛋白（VLDL）和TC可能不是獨立的危險因素，但是它們與心血管病的死亡率也有明顯聯(lián)系，所以，調(diào)整和控制血脂水平是降低動脈粥樣硬化發(fā)病率和死亡率的重要手段之一。水飛薊素體外實驗具有抑制3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A的作用。Krecman等人研究水飛薊素對高膽固醇飲食小鼠引起血膽固醇過多癥的抑制并以丙丁酚作對照藥。其結(jié)果表明：水飛薊素和丙丁酚對總膽固醇和VLDL-C和LDL-C及亞型HDLa和HDLb都有顯著升高作用，但丙丁酚只有降低作用。