中藥血清藥理學(xué)的研究方法及其應(yīng)用

中藥血清藥理學(xué)是近年來逐漸發(fā)展起來的研究中藥藥效較為科學(xué)的一種方法，它是由日本學(xué)者田代真一于1987年首次提出的，是為了研究中藥復(fù)方而誕生的一種新的體外實驗方法，它是在以前體外實驗的基礎(chǔ)上加以改進形成的，即將受試藥物經(jīng)口給予動物后以含藥血清代替中藥粗提物作為藥物源加入離體反應(yīng)系統(tǒng)中研究其藥理作用。它不僅具有體外實驗的優(yōu)點，如條件可控性強，可在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平進行超威、生化、受體、基因等方面的研究；揭示藥物作用機理較為深入，重復(fù)性好，使用材料少等，而且有其更適合中藥及其復(fù)方制劑研究的獨特之處。因為中藥尤其是復(fù)方制劑的化學(xué)成分極其復(fù)雜，經(jīng)過體外的煎煮或其他制備過程，再經(jīng)口服以后在體內(nèi)發(fā)生一系列變化，有的是藥物本身物質(zhì)發(fā)揮作用，有的是經(jīng)過肝臟代謝的產(chǎn)物發(fā)揮作用，有的是通過第二信使間接起作用。因此，以中藥粗提物的體外實驗結(jié)果來評價藥物的體內(nèi)效應(yīng)是不客觀的也是不確切的。而含藥血清能更好的反映藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥理效應(yīng)的真實過程，在理論上更具科學(xué)性和真實性。近年來，許多專家和學(xué)者對中藥血清藥理學(xué)的研究進行了較為深入的研究，并取得了可喜的成績，積累了一定經(jīng)驗，為中藥作用機理、中藥復(fù)方化學(xué)成分、中藥藥動學(xué)的深入研究奠定了基礎(chǔ)。現(xiàn)將其研究方法和應(yīng)用研究現(xiàn)狀作一綜述。

1、國內(nèi)中藥血清藥理學(xué)方法的研究現(xiàn)狀

1．1、在動物的選擇

一般多選用大鼠、家兔、豚鼠等動物來制備含藥血清，但不同種屬的動物，其血清成分不同，因此在選擇動物時應(yīng)盡量選用與人類生物學(xué)活性近似的物種。劉成海等提出在體外培養(yǎng)實驗中宜采用同一種單一血清，既為細(xì)胞提供營養(yǎng)，又為藥物提供載體，還避免了多種血清的干擾，一般家兔和大鼠應(yīng)為首選。

1．2、灌胃次數(shù)與時間間隔

有7～10d法(1次／d，連用7～10d)，3次給藥法(連續(xù)給藥3次，笫1、2次間隔20h，第2、3次間隔4h)，2次給藥法(第1次給藥后2h，再以相同劑量重復(fù)1次)等。

各種給藥方式都是為了達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度，從而便于藥物作用機理的研究。不過嚴(yán)格地說應(yīng)該按藥物半衰期給藥，連續(xù)5～7個半衰期達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度，但由于中藥及其復(fù)方成分復(fù)雜，半衰期很難測定，所以7~10d給藥為權(quán)宜之計。如果對藥物血清時效關(guān)系進行研究，則應(yīng)另當(dāng)別論。

1．3、給藥劑量

在實驗中，由于含藥血清加入體外反應(yīng)系統(tǒng)后，濃度將被稀釋，從而達(dá)不到在體條件下的藥物濃度，反應(yīng)系統(tǒng)可能出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，針對此種情況，李氏等提出按新藥藥理研究的技術(shù)要求設(shè)計劑量給藥，將含藥血清制成冷凍干燥粉(凍干粉)，以凍干粉形式加入反應(yīng)系統(tǒng)，使之達(dá)到所需要的濃度。劉平認(rèn)為給藥劑量應(yīng)以整體模型動物的有效劑量(即為臨床成人劑量的8～18倍量)為妥。

1．4、含藥血清的采集

大鼠一般給藥1～2h后血藥濃度達(dá)峰值，此時血清為最佳含藥血清，超過一天的時間，大部分藥物成分已經(jīng)被代謝和排泄，藥物的直接作用消失，此時的血清為機體功能狀態(tài)血清。當(dāng)然還要考慮例外，因此最好是通過預(yù)實驗來確定最佳采血時間。

1．5、含藥血清滅活與否

許多學(xué)者觀點不一。有的將含藥血清經(jīng)56℃30min滅活，但也有的不經(jīng)滅活，直接進行體外實驗。劉成海等發(fā)現(xiàn)正常大鼠血清無論滅活與否均可維持大鼠肝貯脂細(xì)胞的貼壁生長，兩組大鼠血清對肝貯脂細(xì)胞內(nèi)3H-TdR摻入的影響無明顯差異，劉氏主張血清經(jīng)56℃30min滅活，可排除非藥理性干擾。但徐海波等認(rèn)為藥物血清不宜滅活，因血清經(jīng)滅活以后，血清中含有的機體在藥物作用下產(chǎn)生的內(nèi)源性有效成分將減少或喪失，生物活性降低，會影響藥理實驗結(jié)果，而且與體內(nèi)實驗和臨床用藥情況也不相符。對于血清非藥理性干擾可采取空白對照來衡定和排除，而細(xì)胞培養(yǎng)中的微生物感染，也可用微孔濾膜除菌法來防止。

2、國內(nèi)中藥血清藥理學(xué)的應(yīng)用

2．1、對單核細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)生致熱原的研究

楊奎等應(yīng)用中藥血清藥理學(xué)方法對含黃芩、含香薷、含羌活勝濕湯、含九味羌活丸等的血清分別對家兔單核細(xì)胞內(nèi)生致熱原產(chǎn)生過程中單核細(xì)胞內(nèi)DNA、蛋白質(zhì)合成速率及Ca2+內(nèi)流的影響的機制進行了初步探討。實驗結(jié)果表明，中藥血清藥理學(xué)方法在進行中藥時效關(guān)系研究方面，有著較大的優(yōu)勢。

2．2、對肝貯脂細(xì)胞增殖及膠原合成影響的研究

劉成海、季光等分別采用中藥血清藥理學(xué)研究方法觀察了扶正化瘀方藥對培養(yǎng)大鼠貯脂細(xì)胞功能的影響，結(jié)果表明，扶正化瘀方藥既能促進肝細(xì)胞增殖，又可顯著地抑制細(xì)胞膠原生成率，在一定程度上體現(xiàn)了該方扶正化瘀的雙重作用。

2.3、對主動脈平滑肌細(xì)胞增殖影響的研究

張群豪等觀察了血府逐瘀丸對實驗性動脈粥樣硬化家兔主動脈平滑肌細(xì)胞(SMC)增殖的影響。結(jié)果表明血府逐瘀濃縮丸在體內(nèi)外均有抑制SMC增殖的作用，血府逐瘀丸中含有抗SMC增殖的有效成分，且此成分口服有效。同時，血府逐瘀煎劑濃縮液的抑制作用比含藥血清強，可能與某些有效成分未能從消化道吸收或經(jīng)體內(nèi)代謝失活有關(guān)。本實驗為血府逐瘀丸的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

2．4、抗菌實驗研究

楊奎等使用中藥血清藥理學(xué)方法進行了中藥體外抗菌實驗，發(fā)現(xiàn)含黃芩、藿香正氣水或藿香正氣液的血清分別具有明顯的抑菌作用，抑菌率高達(dá)70％以上。該研究發(fā)現(xiàn)一些含中藥血清具有促進細(xì)菌繁殖作用，表明一些中藥可能降低機體抗御外邪的能力。同時，該研究還發(fā)現(xiàn)，不論是中藥復(fù)方，還是單味中藥，均可出現(xiàn)多個抑菌高峰，表明中藥抗菌有效成分復(fù)雜，其吸收高峰不相一致，可以對細(xì)菌給予多次攻擊，以便抑制其繁殖。因此，中藥血清藥理學(xué)方法有可能成為檢測或反映中藥不良反應(yīng)的新方法。

2．5、對氣管平滑肌作用的研究

黃堅等以小青龍湯煎劑為供試藥物，觀察了含藥血清對離體豚鼠氣管平滑肌的松弛作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，口服小青龍湯煎劑的豚鼠血清具有顯著抗組織胺引起的離體豚鼠氣管平滑肌收縮作用，且呈良好的量效關(guān)系，與其直接煎劑進行的離體藥理實驗具有相似的藥理效應(yīng)。該實驗提示小青龍湯中的抗組織胺的有效成分可通過胃腸道吸收，進入血液而發(fā)揮作用，其有效成分的達(dá)峰時間約為2h，表明血清藥效實驗的可靠性及可信度在某些方面優(yōu)于通常的藥理實驗。

2．6、對免疫功能調(diào)節(jié)的研究

曾南等觀察了雪蓮蟲草精灌服大鼠的抗凝血對NK細(xì)胞活性的影響，結(jié)果表明含藥物抗凝血可明顯增強NK細(xì)胞活性，1.25g／kg劑量給藥動物血清組能增強IL-2活性，但7.5g／kg、3.75g／kg劑量組作用不明顯，相反375g／kg劑量組卻出現(xiàn)抑制作用，這可能與血清的稀釋度及其內(nèi)容物有關(guān)。

2．7對中藥抗瘤作用的研究

王力倩等采用中藥血清藥理學(xué)方法觀察了含苦參、仙鶴草的血清及其煎劑對腫瘤細(xì)胞體外生長的影響，發(fā)現(xiàn)苦參、仙鶴草煎劑及含苦參血清均有明顯的抗腫瘤活性，而含仙鶴草血清則無效。初步證明中藥粗制劑有效而其含藥血清無效，可能與中藥粗制劑干擾因素有關(guān)，也可能與動物在體內(nèi)代謝過程及血清等因素的影響有關(guān)。本實驗提示中藥血清藥理學(xué)方法對中藥抗腫瘤作用的評價有一定的意義。

2．8、對附子強心作用的研究

陳長勛等采用中藥血清藥理學(xué)方法觀察了附子對離體豚鼠左心房收縮力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未服藥動物血清相比，口服附子粗制劑后動物血清有明顯增強心肌收縮力和加快心肌收縮速度的作用，

給藥后2h血清作用達(dá)高峰。證明附子煎液確含強心成分，且此成分口服有效。含附子血清與附子制劑直接給藥兩者對心肌的正性肌力作用基本相似，說明其強心有效成分確能經(jīng)胃腸道吸收入血，且不會一經(jīng)吸收立即被代謝失活。

2．9、對花生四烯酸生物轉(zhuǎn)化影響的研究

Massomi等研究中藥黃連、赤芍、生姜、黃芩等對花生四烯酸生物轉(zhuǎn)化過程影響時發(fā)現(xiàn)，黃連、赤芍含藥血清能夠抑制花生四烯酸的轉(zhuǎn)化，其煎劑濃縮丸卻無效。表明此過程是機體在藥物作用下產(chǎn)生的內(nèi)源性有效物質(zhì)發(fā)揮的作用。

綜上所述，中藥血清藥理學(xué)方法，作為一種新的藥理學(xué)方法，為中藥藥理研究提供了嶄新的思路，為復(fù)方的深入研究提供了一條行之有效、不可替代的途徑，推動了中藥藥理學(xué)的發(fā)展，提高了體外實驗的可信性和可靠性，并使以前無法進行的研究成為可能。但它作為一種新的實驗方法學(xué)，尚處于探索階段，還存在很多問題，還不夠成熟。但可以預(yù)見，隨著中藥化學(xué)分析手段的進步、藥代動力學(xué)的不斷發(fā)展、血清藥理實驗的深入開展，中藥血清藥理學(xué)所面臨的問題會逐一得到解決，中藥血清藥理學(xué)方法會不斷被完善，如能緊密配合中藥化學(xué)、中藥藥代動力學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、微生物學(xué)的研究，中藥走向現(xiàn)代化的過程將被縮短。